细胞培育基的pH一般在7.0-7.4之间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统(是人体血液中最重要的pH缓冲系统)，大多数培育基都是用它来坚持安稳的pH值，用粉末制造培育液时，往往需求参加一定量的碳酸氢钠。

  对于大多数以碳酸盐作为pH缓冲系统的培育液，为了坚持安稳的pH，培育箱中的二氧化碳需求坚持在2-10%之间，以坚持培育液中溶解的二氧化碳浓度。同时，用于细胞培育的容器需求一定程度的通风，以便于气体的交换。

  运用其他pH缓冲系统是否不需求二氧化碳培育箱？已经发现，由于空气中二氧化碳浓度低，假如细胞不在二氧化碳培养箱中培育，培育液中的HCO 3-将被耗尽，这将影响细胞的正常成长。因而，大多数动物细胞的培育依然需求二氧化碳培育箱。

  细胞培育基中常参加其他pH缓冲系统，如HEPES缓冲系统，以增加pH缓冲容量。HEPES在pH7.2-7.4有很强的缓冲能力。当可呼吸的培育容器从二氧化碳培育箱中取出时，培育液中的碳酸盐缓冲系统会由于空气中二氧化碳浓度低而失掉效果。此时HEPES的缓冲系统能够坚持pH安稳。